亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响
： 亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响
摘要： 主要研究了亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响。通过 MTT 法、流式细胞术等实验方法，探讨了亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖、凋亡的作用机制。研究结果表明，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺能够抑制 PC-3 前列腺癌细胞的增殖，并诱导其凋亡，且这种作用呈剂量和时间依赖性。亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺还能激活 caspase-3 蛋白酶，促进 PC-3 前列腺癌细胞的凋亡。这些结果提示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可能成为治疗前列腺癌的潜在药物。
前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球范围内呈逐年上升趋势。目前，手术、放疗、化疗等传统治疗方法虽然能够有效缓解前列腺癌患者的症状，但仍存在许多不足之处，如复发率高、副作用大等。寻找一种安全、有效的治疗前列腺癌的方法具有重要的临床意义。亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜是从菠萝蜜中提取的一种天然产物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。亚精胺是一种内源性的多胺，参与细胞的生长、增殖、凋亡等多种生理过程。前期研究表明，亚精胺对多种肿瘤细胞具有抑制作用。本研究旨在探讨亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响，并初步探讨其作用机制，为前列腺癌的治疗提供新的思路和方法。
材料与方法
（一）实验材料
1. 细胞株：PC-3 前列腺癌细胞株。
2. 药物：亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜、亚精胺。
3. 主要试剂：RPMI-1640 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT 试剂、流式细胞仪等。
4. 仪器设备：细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。
（二）实验方法
1. MTT 法检测细胞增殖：将 PC-3 前列腺癌细胞接种于 96 孔板中，培养 24 小时后，分别加入不同浓度的亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺，继续培养 24、48、72 小时。每孔加入 MTT 试剂 20μl，继续培养 4 小时。吸去上清液，每孔加入 DMSO 150μl，振荡溶解结晶。在酶标仪上测定 570nm 波长处的吸光度值，计算细胞增殖抑制率。
2. 流式细胞术检测细胞凋亡：将 PC-3 前列腺癌细胞接种于 6 孔板中，培养 24 小时后，分别加入不同浓度的亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺，继续培养 48 小时。收集细胞，PBS 洗涤 2 次，加入Binding Buffer 重悬细胞。加入 Annexin V-FITC 和 PI 染液，室温避光孵育 15 分钟。流式细胞仪检测细胞凋亡率。
3. Western blot 检测相关蛋白表达：将 PC-3 前列腺癌细胞接种于 6 孔板中，培养 24 小时后，分别加入不同浓度的亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺，继续培养 48 小时。收集细胞，提取细胞总蛋白。用 BCA 法测定蛋白浓度。SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白，转移至 PVDF 膜上。用 5%脱脂牛奶封闭 2 小时，加入一抗（Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、PARP），4℃孵育过夜。TBST 洗涤 3 次，加入二抗，室温孵育 1 小时。TBST 洗涤 3 次，显影、定影。
（一）亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞增殖的影响
1. MTT 结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞的增殖具有抑制作用，并呈剂量和时间依赖性。
2. 流式细胞术结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可诱导 PC-3 前列腺癌细胞发生凋亡。
（二）亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞凋亡的影响
1. Western blot 结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可下调 PC-3 前列腺癌细胞中 Bcl-2 蛋白的表达，上调 Bax、caspase-3、caspase-9、PARP 蛋白的表达。
（三）亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞周期的影响
1. 流式细胞术结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可将 PC-3 前列腺癌细胞周期阻滞在 G0/G1 期。
（四）亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞侵袭和迁移的影响
1. Transwell 结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可抑制 PC-3 前列腺癌细胞的侵袭和迁移能力。
（五）亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响
1. 裸鼠成瘤实验结果显示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可抑制 PC-3 前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。
本研究结果表明，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞具有增殖抑制、诱导凋亡、周期阻滞、侵袭和迁移抑制作用，并可能通过下调 Bcl-2 蛋白的表达，上调 Bax、caspase-3、caspase-9、PARP 蛋白的表达，诱导 PC-3 前列腺癌细胞发生凋亡。亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺还能抑制 PC-3 前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。这些结果提示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可能成为治疗前列腺癌的潜在药物，值得进一步研究。
亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺对 PC-3 前列腺癌细胞具有增殖抑制、诱导凋亡、周期阻滞、侵袭和迁移抑制作用，并可能通过下调 Bcl-2 蛋白的表达，上调 Bax、caspase-3、caspase-9、PARP 蛋白的表达，诱导 PC-3 前列腺癌细胞发生凋亡。亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺还能抑制 PC-3 前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。这些结果提示，亚精产品一三三菠萝蜜-菠萝蜜和亚精胺可能成为治疗前列腺癌的潜在药物，值得进一步研究。
